توضیحات

RNase R

شماره کاتالوگ: E049

واحد:U ۵۰۰ (۵۰ میکرولیتر)

توضیحات محصول: RNase R یک اگزوریبونوکلئاز E. coli است که فعالیت اگزونوکلئازی را در جهت ′3 به ′5 را نشان ‌می‌دهد. این آنزیم تقریباً همه گونه‌‌های RNA خطی را به طور موثر تجزیه ‌می‌کند. این آنزیم RNA دایره‌ای، RNA با ساختار کمندی یا دو رشته‌ای را با 3 اورهنگ کوتاه (کمتر از هفت نوکلئوتید) را مورد تجزیه قرار نمی‌دهد. به همین ترتیب، این آنزیم به طور ایده آل برای مطالعه RNA با ساختار کمندی تولید شده توسط روش پیرایش کلاسیک و همچنین circRNA‌‌هایی که از طریق پیرایش مجدد بوجود ‌می‌آیند، مناسب است. با حذف RNA‌‌های خطی از عصاره‌‌های سلولی یا RNA، RNase R شناسایی انواع حلقوی را از طریق توالی‌یابی RNA تا حد زیادی تسهیل ‌می‌کند. این امر محققان را قادر ‌می‌سازد تا چشم انداز مربوط به واکنش‌های پیرایش را با دقیق بیشتری بررسی کنند.

برنامه‌‌های کاربردی

• غنی سازی circRNA‌‌ها در نمونه‌‌های بیولوژیکی
• شناسایی توالی‌هایی با ساختار کمند داخلی
• شناسایی circRNA‌‌های اگزونیک (خارجی)
• مطالعه فرایند پیرایش متناوب
• تولید RNA‌‌های سنتزی حلقوی

غلظت: U / μl ۱۰

فرمت: آنزیم با بافر X10 واکنش ارائه ‌می‌شود.

سیستم بیان: E.coli نوترکیب

تعریف واکنش: از بافر واکنش X1  RNase R استفاده کنید و در دمای ۳۷ درجه سانتی‌گراد انکوبه کنید.

بافر واکنش: Tris-HCl ۲۰۰ میلی‌مولار ، KCl ۱ میلی‌لیتر ، MgCl2 ۱ میلی‌مولار ، pH 7.5

شرایط نگهداری: تمام اجزا را در دمای ۲۰- درجه سانتی‌گراد نگهداری کنید. برای حفظ حداکثر عملکرد از چرخه‌‌های متناوب یخ زدایی همه اجزا محصول خودداری کنید. تمام اجزای سازنده از زمان حمل و نقل در صورت نگهداری و استفاده صحیح به مدت ۱ سال پایدار هستند.

بافر ذخیره‌سازی: Tris-HCl (pH 7.5) ۵۰ میلی‌مولار، NaCl ۱۰۰ میلی‌مولار ، EDTA ۰٫۱ میلی‌مولار ، DTT ۱ میلی‌مولار و ۵۰٪ (در v / v) گلیسرول.

نکات محصول

۱) اگر واکنش تجزیه به خوبی صورت نگیرد، از طریق دمای انکوباسیون کمی ‌بالاتر (۴۰ تا ۴۵ درجه سانتی‌گراد) استفاده کنید و آنزیم اضافی را به طور نیمه (به عنوان مثال ۰٫۵ میکرولیتر بعد از ۱ ساعت) اضافه کنید. دمای بالاتر به ویژه برای تخریب RNA‌‌های خطی بسیار ساختاریافته، مانند rRNA‌‌ها بسیار مفید است. توجه داشته باشید که دما را بیش از ۴۵ درجه سانتی‌گراد بالا نبرید و بیش از ۳ ساعت انکوباتور نکنید، زیرا ممکن است منجر به تخریب RNA غیر آنزیمی‌شود.

۲) منیزیم در غلظت‌های ۰٫۱ تا ۱ میلی‌مولار برای فعالیت بهینه  مورد نیاز است. اگر EDTA وجود دارد، با افزودن MgCl₂ به ۱ میلی مولار نهایی، واکنش را تکمیل کنید.

۳) RNase R فعالیت کمی را ‌در tRNA، rRNA و سایر RNA‌‌های با ساختارهای مشخص نشان ‌می‌دهد که دارای انتهای ′3 دو رشته‌ای با یک اورهنگ کوتاه ′3 هستند. این گونه‌‌های RNA ‌می‌توانند آنزیم را متوقف کرده و منجر به کاهش فعالیت آن شوند. برای دستیابی به بهترین نتیجه، حذف rRNA از کل عصاره RNA بسیار توصیه ‌می‌شود.

یک واحد به عنوان مقداری از RNase R تعریف ‌می‌شود که ۱ میکروگرم پلی (A) را در ۱۰ دقیقه در دمای ۳۷ درجه سانتی‌گراد به نوکلئوتید‌های محلول در اسید تبدیل ‌می‌کند.

احتیاط: این محصول فقط برای تحقیقات آزمایشگاهی توزیع ‌می‌شود. برای استفاده تشخیصی مناسب نیست.