توضیحات

پروتئین Cas9 D10A Nickase GFP NLS

مشخصات محصول

سیستم CRISPR / Cas9 (تناوب ‌های کوتاه پالیندروم فاصله‌دار منظم خوشه‌ای) جدیدترین ابزار اندونوکلئاز با قابلیت هدایت RNA در ویرایش ژنوم است که امکان ایجاد اختلال و جایگزینی ژنومی بسیار خاص را فراهم می کند.

یکی از دغدغه هایی که در رابطه با CRISPR Cas9 فعلی وجود دارد این است که اثرات احتمالی خارج از هدف نوکلئاز Cas9 است. برای مقابله با اثرات خارج از هدف اصلی این سیستم، Cas9 Nickase D10A با جهش D10A در حوزه نوکلئاز RuvC1 توسعه داده شد. برخلاف نوکلئاز Cas9، این فرم جهش یافته به جای شکاف دو رشته ای (DSB) ، یک شکاف تک رشته ای ایجاد می کند.

از آنجا که تک شکاف DNA به سرعت توسط ماشین های سلولی با فیدلیتی بالایی ترمیم می شوند، سیستم برای ایجاد همان اختلال ژنومیک نوکلئاز Cas9 به دو شکاف در کنار هم احتیاج دارد.

این ویژگی به طور موثر توالی شناسایی را به جای 20 نوکلئوتید به 40 می رساند، و در نتیجه، احتمال اثرات خارج از هدف به صفر نزدیک می شود. بنابراین، سیستم CRISPR دو نیکاز ویژگی بی نظیری را برای تأمین سخت ترین نیازهای تجربی ارائه می دهد.

Cas9 از باکتری Streptococcus pyogenes مشتق شده است و مخفف آن spCas9 می باشد. spCas9 متداول ترین نوع Cas9 است. همجوشی Cas9 با GFP امکان تأیید بصری ترانسفکشن و همچنین تأیید پاکسازی Cas9 از سلول را فراهم می کند. همچنین Cas9 D10A Nickase-GFP می تواند برای کاربرد های مختلف نظیر FACS و غربالگری استفاده شود. Cas9 D10A Nickase-GFP حاوی توالی لوکالیزاسیون هسته ای آنتی ژن SV40 T در انتهای پروتئین C است.