انتخاب شد:

پورومایسین

پورومایسین

تماس بگیرید

دسته:
Compare

توضیحات

Puromycin (پورومایسین)

شماره کاتالوگ: G264

واحد: ۱ میلی‌لیتر، ۱۰ میلی‌گرم بر میلی‌لیتر

توضیحات محصول: پورومایسین که از باکتری Streptomyces alboniger استخراج شده است، یک آنتی بیوتیک آمینونوکلئوزیدی است که با تداخل در روند ترجمه، سنتز پروتئین را مهار ‌می‌کند. این ماده به طور خاص از انتقال پپتیدیل به ریبوزوم‌های پروکاریوتی و یوکاریوتی جلوگیری ‌می‌کند. آنتی بیوتیک مانع رشد باکتری‌های گرم مثبت و سلول‌های مختلف حیوانی و حشرات ‌می‌شود. باکتری‌های قارچی و گرم منفی به دلیل نفوذپذیری کم در برابر پورومایسین مقاوم هستند. اما در برخی شرایط خاص ‌می‌توان از پورومایسین برای E. coli استفاده کرد. برای بیش از ۳۰ سال، پورومایسین به عنوان ابزاری اساسی برای مطالعه سنتز پروتئین به طور گسترده‌‌ای مورد استفاده قرار گرفته است. در حال حاضر، هیدروکلراید پورومایسین به ویژه برای انتخاب انواع سلول‌های نگهدارنده پلاسمیدهای حامل ژن‌های مقاومت به پورومایسین بسیار مفید است.

مقاومت در برابر پورومایسین

ژن pac رمزگذار Puromycin N-استیل-ترانسفراز (PAC) از سویه استرپتومایسس جدا شده است. این ماده در منطقه‌ای از خوشه pur قرار دارد که با ژن‌های دیگر تعیین کننده مسیر بیوسنتز پورومایسین مرتبط است. با بیان ژن pac، مقاومت به پورومایسین را به سلول‌های پستانداران ترانسفکت شده می‌دهد. تحت برخی شرایط ‌می‌توان از پورومایسین برای انتخاب سویه‌های E. coli که با پلاسمیدهای حامل ژن pac ترانسفورم شده‌اند نیز استفاده کرد.

شرایط انتخاب

عملکرد پورومایسین روی E. coli ضعیف است اما این آنتی‌ بیوتیک به ویژه در آزمایش‌های انجام شده با سلول‌های پستانداران بسیار مورد استفاده قرار می‌گیرد. پورومایسین ‌می‌تواند به عنوان جایگزینی برای سیستم نئومایسین در آزمایش‌ها ترانسفکشن به کار گرفته شود.

سلول‌های پستانداران

غلظت‌های کاری پورومایسین برای رده‌های سلولی پستانداران از ۱ تا ۱۰ میکروگرم در میلی‌لیتر است. در یک آزمایش اولیه ما توصیه ‌می‌کنیم غلظت بهینه آنتی بیوتیک مورد نیاز برای از بین بردن رده سلول میزبان را تعیین کنید. پورومایسین، سلول‌های یوکاریوتی را که فاقد ژن pac هستند به سرعت از بین ‌می‌برد. سلول‌های در حال مرگ از پلیت‌ها جدا ‌می‌شوند که شناسایی کلون‌های ترانسفورم شده را آسان و سریع می‌کنند.

خصوصیات شیمیایی CAS n °: 58-58.2

فرمول: C22H29N7O5، 2HCl

وزن مولکولی: ۵۴۴٫۳

مقادیر pKa :۶٫۸ و ۷٫۲

غلظت: ۱۰ میلی‌گرم در میلی‌لیتر

بررسی اجمالی پروتکل

پورومایسین معمولاً در غلظت‌های از ۱ تا ۱۰ میکروگرم در میلی‌لیتر استفاده ‌می‌شود. پس از ترانسفورماسیون با یک پلاسمید حاوی ژن pac، سلول‌ها در محیط رشد متداول خود که حاوی پورومایسین است، انکوبه ‌می‌شوند تا مواد تراریخته پایدار انتخاب شوند.

۱) ۴۸ ساعت پس از انتقال، سلول‌ها (مستقیم یا رقیق شده) را در محیط تازه حاوی پورومایسین با غلظت مناسب پاساژ کنید.

توجه: وقتی سلول‌ها به طور فعال تقسیم ‌می‌شوند، آنتی بیوتیک‌ها بهترین عملکرد را دارند. اگر سلول‌ها بیش از حد متراکم شوند، کارایی آنتی بیوتیک کاهش ‌می‌یابد. بهتر است سلول‌ها به گونه‌ای تقسیم شوند که بیش از ۲۵ درصد با هم تداخل نداشته باشند.

۲) هر ۳ تا ۴ روز آنتی بیوتیک محیط را حذف و جایگزین کنید.

۳) سلول‌ها را از محل اولیه رشد یا کانون رشد بعد از ۷ روز از انتخاب ارزیابی کنید. بسته به رده سلول میزبان و کارایی ترانسفکشن یا انتخاب، ممکن است کانون رشد به  زمان یک هفته‌ای یا بیشتر نیاز داشته باشد.

۴) ۵ تا ۱۰كلون مقاوم در برابر آنتی بیوتیک را  به یک پلیت كشت سلولی ۳۵ میلی‌متری منتقل كنید و به مدت ۷ روز دیگر آن‌ها  در محیط انتخابی نگه دارید. این محیط کشت برای سنجش سمیت سلولی که بعدا انجام می‌شود، مورد استفاده قرار خواهد گرفت.

شرایط نگهداری: این محصول در دمای انتقال می‌یابد، پس از دریافت این محصول باید در دمای ۴ درجه سانتی‌گراد نگهداری شود. پورومایسین تا سه ماه در دمای اتاق و حداقل یک سال در دمای ۴ درجه سانتی‌گراد پایدار است. برای پایداری مطلوب و ذخیره طولانی مدت، محلول‌های آبی آن را ‌می‌توان در ۲۰- درجه سانتی‌گراد ذخیره کرد.

دیدگاهها

هیچ دیدگاهی برای این محصول نوشته نشده است.

اولین نفری باشید که دیدگاهی را ارسال می کنید برای “پورومایسین”
بستن منو
×

سبد خرید